实验材料
病毒
试剂、试剂盒
无血清培养基、脂质体、胰酶、含血清的培养基、DMEM
仪器、耗材
EP管、6孔板、CO2培养箱、高速离心机、-80°C冰箱
实验步骤
以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×106个293T细胞。
1. 取1.5ml灭菌EP管，加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血清培养基。轻柔混匀，室温孵育5min。
2. 取1.5ml灭菌EP管，取9μl 脂质体2000l溶于250μl无血清培养基中。轻柔混匀，室温孵育5min。
3. 将DNA溶液和脂质体溶液轻柔混匀。室温孵育20min
4. 用胰酶消化并记数293T细胞。用含血清的培养基重悬细胞。
5. 在六孔板中每孔，加入1ml含血清的生长培养基，再加入DNA-脂质体复合物。
6. 将1ml重悬的293T细胞（1×106个细胞/ml）加入到平板中。37℃CO2孵箱中孵育过夜。
7. 移除含有DNA-脂质体复合物的培养基移除，代之以DMEM（含丙酮酸钠和非必须氨基酸）。
8. 转染后48-72h收获含病毒的上清。3000 rpm 离心20min，去除沉淀。
9. 病毒上清-80°C贮存。
包装出来的慢病毒对NIH/3T3细胞达90%以上感染效率。
（本文来源丁香园）
