基因敲除小鼠检测金标准——Southern blot检测

       一般情况下，拿到的订制基因敲除鼠均附带有该小鼠的产品说明书，那么，该通过看哪些关键步骤来确定拿到的是基因型正确的小鼠呢？基因敲除小鼠检测标准都有哪些？基因敲除小鼠的“产品说明书”中哪些检测标准需要尤其关注？ Southern blot检测又为什么能成为基因敲除小鼠检测金标准呢？

基因敲除小鼠三项检测标准

       打靶策略和试验方法，在确定设计时就应该是没有什么问题的。拿到基因敲除小鼠的时候需要特别注意问题就是质控标准。基因敲除小鼠制备过程中，检测标准有三项不可缺少：核型检测、pcr鼠尾检测、Southern检测。

       核型检测是取阳性克隆的细胞，分析细胞的核型。目的是为了排除染色体异常使小鼠出现表型，从而避免试验错误；PCR检测是利用目标片段上、下游引物，扩增出特定位置条带的反应。验证了目的片段有没有整合到对应的基因组中。Southern blot杂交是进行基因组DNA特定序列定位的方法。

       其操作过程是利用电泳分离经酶消化后的DNA片段，然后在将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的DIG标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量。

       Southern杂交的目的是为了检测目的基因的插入位置及拷贝数量。如果经过这三项检测，均获得阳性结果，基本就可以确认得到的基因敲除小鼠基因型是没有问题的。

为什么Southern是基因敲除小鼠检测的金标准呢？

       在制备基因敲进和条件性基因敲除模式小鼠过程中，Southern blot检测是非常重要的一步。依据我们大量的数据统计分析，采用ES细胞方式制备，大约有20%的概率有随机插入；

       采用CRISPR/Cas9技术，大约有35%的概率有随机插入。而随机插入必须通过Southern blot才能排除。做模式动物的朋友，一定要让你的服务商做Southernblot，否则你大量的时间和金钱投入可能化为乌有。

       （本文转载丁香园）