目的:探究磷脂酶(PLC)Cγ1在卵母细胞减数分裂恢复中的作用及机制,进一步阐明卵母细胞成熟的分子机理,为与相关的人体临床应用提供理论基础。

方法:利用Real-time PCR检测PLC不同亚型在颗粒细胞与卵丘细胞中的表达情况,构建体外卵泡培养模型及COC培养模型研究PLCγ1特异抑制剂U73122对LH及EGF诱导的减数分裂恢复的影响,利用钙离子荧光探针Fluo3-AM检测胞内钙离子水平变化,酶联免疫法检测胞内cGMP水平变化,利用Real-time PCR、Western blot以及免疫组化检测不同亚型 4,5-三磷酸肌醇受体(IP3R)的表达变化情况。

结果:研究表明,颗粒细胞与卵丘细胞中Plcγ1mRNA的表达均显著高于其它亚型(P<0.05),U73122能够有效抑制LH和EGF诱导的卵母细胞减数分裂恢复(P<0.05)以及EGF诱导的卵丘细胞内钙离子水平升高(P<0.05),U73122还显著逆转了EGF介导的胞内cGMP水平下降(P<0.05),此外,研究还发现在颗粒细胞,卵丘细胞与卵母细胞中Itpr1mRNA的表达量显著高于其它亚型(P<0.05),Western blot与免疫组化的结果也表明IP3R1在三种细胞中均有表达。

结论:LH-EGFR信号通过PLCγ1-IP3R1升高胞内钙离子水平诱导卵母细胞减数分裂恢复。