目的:利用 CRISPR/Cas9 技术敲除巴马小型猪 4-羟基苯丙酮酸氧化酶(4-OH phenylpyruvate dioxygenase,4HPPD/HPD)制备高酪氨酸血症 III 型巴马小型猪模型｡

方法:分别从质粒 pGL3-U6-gRNA-PGKpuromycin和 pST1374-NLS-flag-linker-Cas9 中通过PCR扩增sgRNA-Hpd和Cas9体外转录用模板,接着体外转录出 Cas9mRNA和sgRNA-Hpd,最后将Cas9mRNA和sgRNA-Hpd共注射入巴马小型猪受精卵的胞质内,以制备Hpd 基 因敲除巴马小型猪｡

结果:胞质内共注射后,共移植20枚受精卵至2只代孕母猪｡ 获得子代 Hpd 基因敲除巴马 小型猪共4只｡

结论:本研究成功制备了高酪氨酸血症III型巴马小型猪模型,将为研究酪氨酸代谢通路提供更 好的模型｡