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山羊肺泡巨噬细胞的分离、培养与鉴定-【课题实验整体外包】

目的:建立高纯度的肺泡巨噬细胞分离培养方法,为研究巨噬细胞的生物学特性和细胞内寄生虫的存活机制提供材料。

方法:在无菌环境中用PBS冲洗山羊的肺几次。收集细胞后,将外周血单核细胞分离液与密度梯度离心法结合使用,以从混合细胞中分离出绵羊肺泡巨噬细胞。通过观察10种细胞培养基中的%胎牛血清,倒置显微镜下的细胞形态并使用鸡红细胞的吞噬功能来检测细胞活力。流式细胞仪用于检测CD14、CD14是单核细胞和巨噬细胞表面的特征标记。

结果:所产生的贴壁细胞具有巨噬细胞的典型形态特征,具有假鞘和突起,显示出圆形和不规则形状,细胞学丰富,且细胞体较大;培养的巨噬细胞54.5%的鸡红细胞吞噬作用强吞噬作用; 93.7 %的细胞可以在连续体外培养近1个月内特异性表达具有巨噬细胞特异性免疫表型的CD14抗原。

结论:本研究获得的山羊肺泡巨噬细胞纯度高,生物学活性强,为研究细胞内寄生虫病的机理提供了细胞模型。

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