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【课题实验整体外包】-抑制素基因敲除小鼠模型的构建及表型初步分析

目的:利用成簇、规则间隔、短间隔parindrome重复(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)]基因编辑技术构建抑制素基因敲除小鼠模型,并对其初步表型进行分析。

方法:根据抑制素α亚基第一个外显子的碱基序列,设计单个guideRNA sgRNA识别序列,构建sgRNA表达质粒。使用T7NA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9 mRNA后,将sgRNA/Cas9 mRNA显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,通过PCR和基因测序检测新生小鼠抑制素α亚基的基因碱基突变。选择F2基因敲除纯合子的雄性和雌性小鼠,观察雄性睾丸和雌性小鼠卵巢,进行石蜡切片和HE染色分析。

结果:共获得12只FO代抑制素基因敲除小鼠。 8号雄性小鼠与C57BL/6J雌性小鼠回交得到F1代小鼠,再交配得到F2代小鼠。 F2代小鼠基因型比例符合孟德尔定律,基因敲除小鼠不胚胎致死。 F2 纯合小鼠的睾丸和卵巢发生癌变,无法生育。

结论:我们已经成功构建了抑制素基因敲除小鼠模型。 F2 纯合小鼠的癌变表型表明抑制素在小鼠生殖系统中起着重要作用。

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