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细胞中mRNA原位杂交技术(五)

附表1:部分试剂配制
1 0.1mol/L三乙醇胺-0.25%乙酸酐:三乙醇胺13.2ml,氯化钠5g,浓盐酸4ml,DEPC水定容至约1000ml,临用前,一边摇动溶液一边加入乙酸酐2.5ml,充分混合。
2 10×PBS:氯化钠 80g,Na2HPO4·12H2O2 32.3g,NaH2PO4·2H2O2 4.5g。加DEPC水900ml,用HCl/NaOH调pH至7.2,最后定容为1000ml。
3 20×SSC(pH=7.0):氯化钠175.3g,枸橼酸钠88.2g,DEPC水(ddH2O)定容至1L。
4 100×Denhardts:Ficoll1g,PVP1g,BSA1g,DEPC水定容至50mL。
5 预杂交液:2×SSC,50%甲酰胺,100ug/ml变性鱼精DNA,5×Denhardts。
6 杂交液:2×SSC,50%甲酰胺,1×Denhardts,250μg/mL酵母tRNA或100μg/mL变性鱼精DNA,10mmol/L Tris-HC1 (pH7.5),0.5%SDS,5%葡聚糖硫酸酯,标记探针。
7 PBT:1×PBS,0.1%Triton×100,2mg/mL BSA使用前加入。
8 封闭液:0.1mol/L Tris-HCI pH7.5,0.15mol/L NaCI,0.5%羊血清或2%BSA。
9 显色缓冲液:100mmol/L Tris-HCI pH9.5,100mmol/L NaCI,50mmol/L MgCl2。
10 显色液:4.5μL/mL NBT,3.5μL/mL BCIP,用显色缓冲液配制。
11 显色终止液:0.1mol/L Tris-HCl pH8.0,10mmol/L EDTA。












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