目的:利用CRISPR/Cas9技术构建牛磺酸转运体基因敲除大鼠,繁殖并鉴定,为研究牛磺酸缺失对神经系统疾病的影响提供稳定的大鼠模型｡

方法:针对 Slc6a6基因第5 外显子,设计向导RNA(single-guide RNA,sgRNA)介导Cas9核酸酶与靶点DNA特异性结合,并切割基因组DNA, 被切割后的DNA进行重组修复,从而实现基因的敲除｡ 通过基因型鉴定和测序分析检测新生大鼠基因型｡ 利用 Real-time PCR､Western blot技术和免疫组化等方法,分析大鼠脑组织的牛磺酸转运体(taurine transporter,TauT)的 mRNA表达和蛋白表达,建立 Slc6a6 基因敲除大鼠模型｡

结果:F3 代出现 21 只 Slc6a6 基因敲除纯合子 (TauT-/-),54只杂合子(TauT+/-),27只阴性(TauT+/+),F3 代纯合率约为20.59%,基本符合孟德尔遗传定律｡ Slc6a6基因敲除纯合子大鼠脑组织mRNA水平基本不表达,TauT蛋白表达水平显著低于同窝阴性大鼠｡

结论:本 研究利用CRISPR/Cas9系统定向敲除 Slc6a6基因,成功构建 Slc6a6基因敲除大鼠模型｡