目的：建立快速检测实验大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR方法｡

方法：根据大鼠冠状病毒 N 基因､仙台病毒 L 基因设计特异性引物;经过双重PCR优化,特异性和敏感性的检测,建立双重PCR体系｡ 应用该 PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本和实验动物组织样本,并与ELISA方法比对｡

结果：双重PCR扩 增出大鼠冠状病毒(168bp)和仙台病毒(262bp)目的条带,PCR扩增产物测序结果利用核酸BLAST功能进行同源 序列对比,仙台病毒和大鼠冠状病毒同源性分别为100%和99%｡ 仙台病毒和大鼠冠状病毒的检测下限为1.56× 102copies/μL｡ 特异性检测对小鼠肝炎病毒扩增,产生片段大小近似大鼠冠状病毒产物｡ 应用建立的双重PCR体 系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本,30份DNA标本均被检出;检测94份实验动物肺组织样本,结果均阴性｡

结论：建立的双重PCR方法操作简单､快速､特异性强､灵敏度高,能够实现对实验动物仙台病毒和大鼠冠状病毒 病原体的快速检测｡