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组织块移植模型

(一)皮下移植法

将肿瘤组织用平衡盐溶液洗涤多次,弃除表面的血液,然后浸泡在用无菌培养皿盛载的无血清培养基中,用手术小剪刀将之剪成1~2立方毫米大小的组织小块。取6~8周裸小鼠或SCID小鼠于左侧或右侧颈背部进行消毒,然后用手术小剪刀于左侧或右侧肩胛骨前方的皮肤剪一小口,接着将手术小剪刀(前端要合拢)从这一小口进去,照着同侧耳朵的方向推进小剪刀,一边推进同时一边轻轻撑开皮下的疏松结缔组织使之成为一小隧道。皮下小隧道越小越好,长约1cm左右。最后用直头的手术小镊子夹取肿瘤小组织块送进皮下小隧道的尽头并轻轻压迫皮肤入口。或者用腰穿针吸取肿瘤小组织于裸小鼠或SCID小鼠左侧或右侧肩胛骨前方的皮肤进针至皮下,然后照着同侧耳朵的方向推进,进针约1cm左右后将肿瘤小组织推入皮下,最后退针并轻轻压迫皮肤入口。也可以进行腹股沟皮下移植,方法一样。每天观察,约1周左右可观察到接种部位肿瘤组织凸起生长。

(二)肾包膜下移植法

将肿瘤组织用平衡盐溶液洗涤多次,弃除表面的血液,然后浸泡在用无菌培养皿盛载的无血清培养基中,用手术小剪刀将之剪成1立方毫米大小的组织小块。取6~8周裸小鼠或SCID小鼠于左侧或右侧腰腹部进行消毒,然后用手术小剪刀于左侧或右侧腰腹部相当于肾区位置的皮肤和腹壁剪一小口,暴露肾脏。用腰穿针吸取肿瘤小组织,然后轻轻刺破肾包膜并将肿瘤小组织注射到肾包膜下。退针后轻轻压迫包膜的入口,最后缝合腹壁和皮肤。

(三)原位接种法

根据实体瘤来源组织的不同,采取不同组织的接种。如:来源肝脏组织的肿瘤进行裸小鼠或SCID小鼠肝包膜下的接种;来源于肺组织的肿瘤进行裸小鼠或SCID小鼠肺包膜下的接种;来源于卵巢组织的肿瘤进行裸小鼠或SCID小鼠靠近卵巢处的卵巢系膜内或卵巢包膜下接种;来源于脑组织的肿瘤进行裸小鼠或SCID小鼠脑内的接种;来源于胃组织的肿瘤进行裸小鼠或SCID小鼠胃壁内的接种;来源于膀胱组织的肿瘤进行裸小鼠或SCID小鼠膀胱壁内的接种等。

接种方法与肾包膜下移植法相似:将肿瘤组织用平衡盐溶液洗涤多次,弃除表面的血液,然后浸泡在用无菌培养皿盛载的无血清培养基中,用手术小剪刀将之剪成1立方毫米大小的组织小块。取68周的裸小鼠或SCID小鼠于不同的器官相应的部位进行皮肤消毒,然后用手术小剪刀将皮肤和腹壁或胸壁等剪一小口,暴露相应的器官。用腰穿针吸取肿瘤小组织,然后轻轻刺破相应器官的包膜并将肿瘤小组织注射到包膜下或胃壁或膀胱壁内。退针后轻轻压迫包膜的入口,最后缝合腹壁或胸壁和皮肤。

如果是异种的细胞或组织接种免疫功能正常的小鼠,在接种之前还需要对小鼠进行抑制免疫排除反应的处理,方法一般分为两种:

1.放射线照射(γ射线4.5Gy或者137Cs 2.0~4.0Gy亚致死剂量全身照射),使小鼠的全身免疫功能受到抑制,预处理24小时后再接种肿瘤细胞或组织。

2.化疗药物腹腔注射  如腹腔注射环磷酰胺预处理,24小时后注射肿瘤细胞。

移植性肿瘤模型最大的特点是可以使一群动物带有同样的肿瘤,生长速率较一致,个体差异较小。对宿主的影响也类似,易于客观判断疗效。当然,不同的造模方法也有不同的特点。腹腔接种非实体瘤细胞操作简单,并且腹水含有丰富的营养成分可以给肿瘤细胞的生长足够的营养。实体瘤组织皮下移植生长的肿瘤易于被观察和测量;也可以进行动物活体观察和测量;手术过程简单快速;但不是肿瘤生长最适合的位置。实体瘤组织肾包膜下移植手术过程要复杂些;但肾脏含有丰富的血管网,所以供血丰富,相对于皮下移植,其肿瘤容易生长;但对于非肾脏肿瘤也不是最适合的生长位置;另外,生长的肿瘤不易于被观察和测量,要使用动物活体成像系统进行在体观察或处死动物解剖观察和测量。实体瘤组织原位接种最适肿瘤组织的生长;但相对于皮下和肾包膜下移植方法,手术过程要复杂;生长的肿瘤不易于被观察和测量,要使用动物活体成像系统进行在体观察或处死动物解剖观察和测量。

腹腔接种以动物腹部增大视为成功,目测即可。皮下接种的以接种部位凸起视为成功,使用测量卡尺和目测即可观察肿瘤的生长情况。肾包膜下移植和原位接种的需要用活体成像系统检测接种部位是否有肿瘤生长。

移植性肿瘤模型用于肿瘤发生和发展研究、肿瘤细胞系的建立以及高转移性肿瘤细胞株的筛选、抗肿瘤药物筛选实验等。

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